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Modul 7B: Enzymkinetik

Quantifizierung einer Enzymaktivität (ONPG-Assay)

Dieses Experiment befindet sich momentan noch in der Erprobungsphase.

Möchte man die Geschwindigkeit einer enzymatischen Reaktion ermitteln, muss man
entweder den Substratverbrauch oder die Produktbildung pro Zeiteinheit ermitteln.
Der ONPG-Assay erlaubt eine quantitative Bestimmung der Enzymaktivität der
β-Galactosidase, da hierbei im Gegensatz zu Glucoseteststäbchen differenziertere Daten
erhoben werden können. Gemessen wird die Umsetzung des lactoseähnlichen Subtrats ONPG
(o-Nitrophenyl-β-D-galactosid) in o-Nitrophenol mittels Spektralphotometer.

Am Ende können Berechnungen durchgeführt werden, wie lange eine bestimmte Enzymmenge der selbst hergestellten ß-Gal brauchen würde um die Lactose in einem Glas Milch umzusetzen.

Methoden

Bestimmung von Enzymaktivitäten mittels Photometer, Protokollieren von Messdaten (z.B. tabellarisch), graphische Auswertung der Ergebnisse (z.B. mit Millimeterpapier)

Dauer

1-3 h (in Abhängigkeit der Probenanzahl)

Vorraussetzungen

Enzyme und Enzymreaktion

Altersstufe

Oberstufe

Material

Materialien und Skripte sind für Science Bridge Mitglieder frei verfügbar.

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  • Skript zu Modul 7B - Enzymkinetik (ONPG-Assay)

    Diese erste Fassung des Skriptes wurde im Rahmen der Erprobungsphase in einem Uni-Grundpraktikum eingesetzt. | Eingestellt am: 20. November 2008

  • Prinzip des ONPG-Assays

    Eingestellt am: 15. März 2009